TPn01 : Isolement et caractérisation de quelques levures

Objectifs :

• Apprendre les techniques d'isolement des levures à partir de divers échantillons.
• Étudier les caractéristiques morphologiques.

Introduction

En plus de leur utilisation en boulangerie, Saccharomyces cerevisiae est également d'une grande importance dans l'industrie de la fermentation, où elle est employée pour la production de certains nutriments et vitamines. Grâce à ses caractéristiques génétiques et physiologiques, cette levure a également été largement étudiée en biologie cellulaire et en génétique, servant de modèle pour des recherches sur le métabolisme cellulaire, la division cellulaire et l'apoptose.

1.     Protocole de travail :

Etape 01 : Observation des levures :

Matériel :

L’alcool  et l’eau de javel Microscope optique ; Levure de boulanger ; Boite de pétri ; Sucre ; Eau ; Lame et lamelle.

Mode opératoire 

Etape 01

·       Dans une boîte de Pétri stérile (90 mm de diamètre), 1,0 g de levure de boulanger lyophilisée est réparti uniformément, puis 0,5 g de saccharose (sucre) est ajouté, avant l’adjonction de 5 mL d’eau distillée stérile afin d’humidifier l’ensemble.

·       On laisse le mélange pendant 10 à 15 min.

·       On dépose une goutte du mélange sur la lame et on rajoute une goutte d'eau.

·       On pose la lamelle tout en évitant la formation des bulles d'air.

·       On passe à l'observation GX10 puis GX40.

Etape 02 : isolement des levures

·       Matériel de travail :

L’alcool et l’eau de javel, Le bec bunsen, les tubes de dilutions (eau physiologique), Les milieux de culture (OGA ou bien extrait de Malt), Les boites de Pétri, les pipettes stériles, les pipettes Pasteur et les anses de platines et vortex, échantillon : Raisin sec ou autre.

 Mode opératoire 

-        10g d’échantillon est pesé et mélangé à 90ml d’eau distillée la dilution 10est ainsi réalisée.

-        1ml de cette dilution est prélevé et mélangé à 9ml d’eau distillée stérile, la dilution 10^-1 est ainsi réalisée jusqu'à la dilution 10.

-        Versez entre 10à15ml du milieu de culture dans des boîtes de pétri stériles.

-        Laissez les boîtes se solidifier et sécher à température ambiante.

-        Prélevez 100 μl de l'inoculum à la dilution souhaitée.

-        Étalez cet inoculum en surface à l’aide d’un râteau sur deux boîtes contenant le milieu de culture.

-        Placez les boîtes de pétri à l'envers dans l'incubateur.

-        Incubez à 30°C pendant 72h.

2.     Résultat : La description macro et micromorphologique :

3.     Conclusion :