TP N 03 : Technique de la double coloration des tissus végétaux

 

INTRODUCTION

            Les colorations topographiques permettent, par leurs affinités différentielles, de colorer les tissus avec des couleurs différentes. Il existe plusieurs, dont la double coloration au rouge Congo-vert de méthyle (Nezelof, Galle, Hinglais ; 1972). Cette coloration permet de colorer les parois cellulaires lignifiées en vert et les parois cellulaires pecto-cellulosiques en rouge. Les coupes sont réalisées soit à main levée ou bien à l’aide d’un microtome (appareil permettant de faire des coupes de 2 à 25µm).

A) Matériel

- Lames, lamelles, verres de montre, scalpels, lames à rasoir, seringues.

- Microscope.

- Bâton de moelle de sureau

- Eau distillée, glycérine, eau de javel, acide acétique, colorants (vert de méthyle et rouge Congo)

- Tiges de la mauve (Malva sylvestris ; Famille : Malvaceae ; Classe : dicotylédones)

B) Protocole expérimental 

            Les coupes réalisées à main levée sont :

1-      trempées dans de l’eau de javel durant 15 à 20 min ;

2-      lavées à l’eau distillée (2 à 3 fois) ;

3-      mordancées avec de l’acide acétique pendant 5 min ;

4-      lavées à l’eau distillée (2 à 3 fois) ;

5-      colorées pendant 5 min avec le vert de méthyle 0,1% ;

6-      lavées à l’eau distillée (2 à 3 fois) ;

7-      colorées pendant 20 min avec le rouge Congo 0,1% ;

8-      rincées avec l’eau distillée (2 à 3 fois) ;

9-      montées avec une goutte d’eau entre lame et lamelle et observées au microscope optique.

C) Fonction des différentes solutions utilisées :

Liquide	Fonction	Durée conseillée
Eau de javel	Destruction du contenu cellulaire	15 à 20 min
Eau distillée	Rinçage (très important : s'il reste de l'eau de Javel, les colorants suivants seront décolorés).	30 s
Solution d'acide acétique diluée	Mordançage (aide à la fixation des colorants).	5 min
Eau distillée	Rinçage	30 s
Vert de méthyle	Coloration en vert de la lignine, de la subérine et de la cutine.	5 min
Eau distillée	Rinçage pour arrêter la fixation du colorant.	30 s
Solution de rouge Congo	Coloration en rose de la cellulose des parois.	20 min
Eau distillée	Rinçage	30 s

Résultat de l’observation